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產(chǎn)品及特點(diǎn)：
克里米亞-剛果出血熱（Crimean-Congo hemorrhagic fever, CCHF），是一類在亞洲、中東、歐洲南部、非洲等地區(qū)的丘陵及平原地區(qū)廣泛流行的蜱傳疾病，曾經(jīng)在全球的 30 余個國家多次爆發(fā)并引起致死案例。該病在我國又稱新疆出血熱（XHF），主要分布于我國西北地區(qū)，是我國重要的蟲媒疾病之一。該病的致病病原體為克里米亞-剛果出血熱病毒（CCHFV），分類學(xué)上屬于負(fù)鏈 RNA 病毒布尼亞病毒科（Bunyaviridae）內(nèi)羅病毒屬（Nairovirus）。其主要的傳播媒介與貯藏宿主為蜱，在經(jīng)攜帶該病毒的蜱蟲叮咬之后，可出現(xiàn)高熱、出血、腎損傷、心血管衰竭等癥狀，平均致死率約為 30%?？死锩讈?剛果出血熱病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的克里米亞-剛果出血熱病毒檢測的試劑盒。
1. 一站式，用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對照。
2. 根據(jù)克里米亞-剛果出血熱病毒的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。
規(guī)格及成分：
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編號 |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL（橘黃蓋） |
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試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL（紅蓋） |
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試劑三 |
超純水 |
1 mL（亮黃蓋） |
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試劑四 |
克里米亞-剛果出血熱病毒 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑五 |
克里米亞-剛果出血熱病毒 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑六 |
使用手冊 |
1 份 |
運(yùn)輸及保存：
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑：
樣品 RNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL克里米亞-剛果出血熱病毒PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ铡Ｖ苽渌贸蔀闃悠?RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容?？梢赃x購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設(shè)置RT- PCR 反應(yīng)(20μL 體系)：
3. 如果有 N+2 個樣品，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
|
成份 |
N+2 個 樣品管 |
RT-PCR 陰性對照 |
RT-PCR 陽性對照 |
|
5×雙酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
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克里米亞-剛果出血熱病毒 RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
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N+2 個制備的 RNA 樣品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
|
超純水 |
-- |
12.5μL |
-- |
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克里米亞-剛果出血熱病毒 RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液 |
-- |
-- |
12.5μL |
|
MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
|
過程 |
溫度 |
時間 |
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逆轉(zhuǎn)錄 |
42℃ |
30 min |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應(yīng)35個循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
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58℃ |
30 sec |
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72℃ |
20 sec |
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最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測擴(kuò)增效果。如果陰性對照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對照無擴(kuò)增產(chǎn)物，則說明實(shí)驗失敗，需要分析實(shí)驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴(kuò)增產(chǎn)物、陽性對照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn)，才有必要分析樣品的實(shí)驗結(jié)果，如果有預(yù)期片段大小的擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。
四、特別提示：
本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實(shí)驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
