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產(chǎn)品及特點(diǎn)：
禽致病性大腸桿菌 O1 血清型（Avian Pathogenicity Escherichia coli， APEC）會(huì)引發(fā)大腸桿菌敗血癥，尤其在冬季發(fā)病率高，死淘率通常在 5%-20%， 嚴(yán)重的可達(dá) 50%，雛雞在夏季也較多發(fā)，病雞精神不振，采食減少，衰弱和死 亡，病雞腹部膨滿，排出黃綠色的稀便，特征性的病變是纖維素性心包炎，氣 囊混濁肥厚，有干酪樣滲出物，肝包膜呈白色混濁，有纖維素性附著物，有時(shí) 可見(jiàn)白色壞死斑，脾充血腫脹，給養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)損失，因此禽致病性 大腸桿菌 O1 血清型檢測(cè)具有重要的意義。本試劑盒根據(jù)熒光定量 PCR 原理開(kāi) 發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增禽致病性大腸桿菌O1血清型，與其他病原沒(méi)有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規(guī)格及成分：
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編號(hào) |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL（紅蓋） |
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試劑二 |
超純水 |
1 mL（亮黃色） |
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試劑三 |
禽致病性大腸桿菌O1血清型 PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑四 |
禽致病性大腸桿菌O1血清型 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑五 |
使用手冊(cè) |
1 份 |
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：
樣品 RNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加10μL禽致病性大腸桿菌O1血清型PCR陽(yáng)性對(duì)照的1000倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后得到模板 DNA放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：
3. 對(duì)N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分：
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成份 |
N+2 個(gè)樣品管 |
PCR 陰性對(duì)照 |
PCR陽(yáng)性對(duì)照 |
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PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
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禽致病性大腸桿菌O1血清型PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
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N+2個(gè)樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
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PCR 陰性對(duì)照（水） |
-- |
18μL |
-- |
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PCR 陽(yáng)性對(duì)照（禽致病性大腸桿菌O1血清型PCR陽(yáng)性對(duì)照1000倍稀釋液） |
-- |
-- |
18μL |
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過(guò)程 |
溫度 |
時(shí)間 |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
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55℃ |
30 sec |
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72℃ |
40 sec |
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延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示：
本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
