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    品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

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    產(chǎn)品中心

    • 埃希氏菌屬通用PCR試劑盒

      規(guī)格：
      數(shù)量：

      購買數(shù)量

      • 品牌 : 通蔚生物
      • 目錄號 : TW37091
      • 應(yīng)用 : 僅供科研使用
      • 保存條件 : 低溫/避光保存
      • 貨期 : 現(xiàn)貨
      • 商品庫存：100
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    產(chǎn)品及特點：
    埃希氏菌屬（Escherichia spp.）包括大腸埃希氏菌,即埃希氏菌屬通用(Escherichia coli)、傷口埃希氏菌(Escherichia vulneris)、弗格森埃希氏菌(Escherichia fergusonii)、赫氏埃希氏菌(Escherichia hermanii)和塞內(nèi)加爾埃希氏菌(E .senegalensis)等菌種, 是動物腸道正常菌群之一，但在某些條件下, 如機體防御機能降低或濫用抗生素等, 此菌可進入機體的其他部位引起感染。以往對腸道菌群的研究主要依賴對腸黏膜和糞便細菌的分離培養(yǎng)鑒定, 可以分離的細菌種類有限，因此快速靈敏檢測埃希氏菌具有重要的意義，本試劑盒就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)，
    1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。
    2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增埃希氏菌屬通用，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
    3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
    4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
    5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
    規(guī)格及成分：

    編號

    成分

    規(guī)格

    試劑一

    PCR MagicMix 3.0

    1mL（紅蓋）

    試劑二

    超純水

    1mL（亮黃色）

    試劑三

    埃希氏菌屬通用PCR引物混合液

    100μL（白蓋）

    試劑四

    埃希氏菌屬通用PCR陽性對照1×10E8 /μL

    50μL（黃蓋）

    試劑五

    使用手冊

    1 份

    運輸及保存：
    低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。
    自備試劑：
    樣品 DNA。
    使用方法：
    一、樣品 DNA 的制備：
    1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容?？梢赃x用本公司柱式病毒 DNAout。
    2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL埃希氏菌屬通用PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
    二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：
    3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設(shè)置N+4個反應(yīng)。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：

    成份

    N+2個樣品管

    PCR陰性對照

    PCR陽性對照

    PCR Magic Mix 3.0

    各20μL

    20μL

    20μL

    埃希氏菌屬通用PCR引物混合液

    各2μL

    2μL

    2μL

    N+2個樣品DNA模板

    各18μL

    --

    --

    PCR陰性對照(水)

    --

    18μL

    --

    PCR陽性對照埃希氏菌屬通用PCR陽性對照1000倍稀釋液

    --

    --

    18μL

    4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

    過程

    溫度

    時間

    預(yù)變性

    95℃

    5 min

    PCR 反應(yīng)35個循環(huán)

    95℃

    30 sec

    55℃

    30 sec

    72℃

    40 sec

    最后延伸

    72℃

    7 min

    三、電泳檢測：
    5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。
    四、特別提示：
    本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
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