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夾心 ELISA法優(yōu)點和步驟詳解

發(fā)布時間:2024-01-15     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  ELISA 主要有四種類型:直接 ELISA、間接 ELISA、夾心 ELISA 和競爭 ELISA。每個都有獨特的優(yōu)點、缺點和適用性。今天,上海通蔚生物帶大家認識夾心ELISA試劑盒及步驟。詳細了解ELISA類型可以參考《ELISA 的類型》。

  夾心酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)是有效的實驗室程序,有助于檢測樣品中目標抗原的存在并測量其濃度。該測試用于計算兩層抗體(即捕獲抗體和檢測抗體)之間的抗原。在夾心 ELISA 中,兩種抗體在使用前必須配對并進行測試。此外,在進行夾心 ELISA 時,捕獲抗體和檢測抗體不得干擾彼此的結(jié)合能力。夾心 ELISA 的主要優(yōu)點之一是能夠特異性測量不純樣品中的抗原。三明治檢測的極其穩(wěn)健的性質(zhì)使其成為醫(yī)療目的的絕佳診斷工具,特別是用于識別潛在的食物過敏原或測試某些藥物。

  什么是夾心ELISA


  如前所述,該測試可用于識別和量化未知樣品中的抗原濃度。由于該測試的過程使用至少兩種抗體,因此待測量的抗原還必須具有至少兩個能夠與抗體結(jié)合的非重疊表位(抗原決定簇)。在夾心 ELISA 中,單克隆和多克隆抗體用作檢測和捕獲抗體。單克隆抗體用作檢測抗體,因為它們有助于更準確的檢測和定量,而;多克隆抗體被用作捕獲抗體,因為它們有助于盡可能多地結(jié)合抗原。詳細了解單克隆和多克隆可以參考《蛋白質(zhì)免疫測定:認識多克隆抗體和單克隆抗體


elisa


  夾心elisa優(yōu)點


  夾心ELISA檢測有哪些優(yōu)點?

  夾心 ELISA 測試涉及使用兩種抗體。因此,在夾心 ELISA 的幫助下,可以更特異性地捕獲和檢測抗原。

  夾心 ELISA 測試更適合復雜的樣品,因為抗原在測量前不需要純化。

  夾心 ELISA 比直接和間接 ELISA 測試的靈敏度高 2 至 5 倍。它還可以快速、準確地得出未知樣品中的抗原結(jié)果。

  在此可以使用直接和間接檢測方法,因此夾心ELISA具有良好的靈敏度和靈活性。

  夾心 ELISA 步驟


  第一步是用特定數(shù)量的捕獲抗體準備表面(例如多孔板)。

  接下來,封閉表面上未結(jié)合的蛋白質(zhì)結(jié)合面,以減少背景和非特異性結(jié)合。

  之后,將含有目標抗原的樣品添加到板中。應允許靶抗原孵育,以便它可以與固定的捕獲抗體結(jié)合。

   洗滌,以除去未結(jié)合的抗原。

  接著,添加檢測抗體,同時確保它與捕獲抗體結(jié)合到抗原上的不同位置。  

  再次,孵育后,清洗板,以除去連接的未結(jié)合的抗體-酶。  

  在此步驟中,添加被酶改變顏色、電化學信號或熒光的底物?,F(xiàn)在測量多板孔上的熒光或電化學信號以確定抗原的存在和數(shù)量。

  

  
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